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產(chǎn)品中心細(xì)胞培養(yǎng)ipsc培養(yǎng)基套裝友康iPSC無(wú)血清培養(yǎng)基套裝NC0401+NC0401.S
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品分類
化學(xué)成分明確的iPSC無(wú)血清培養(yǎng)基，產(chǎn)品性能良好，細(xì)胞連續(xù)穩(wěn)定傳代，仍能保持其干性。
本產(chǎn)品用于培養(yǎng)經(jīng)過(guò)重編程誘導(dǎo)成的人多能干細(xì)胞(hiPSC)，并能夠連續(xù)傳代，保持其干性。成分明確，培養(yǎng)時(shí)不需添加任何額外成分（Y27632除外）。支持隔天補(bǔ)液。本培養(yǎng)基用于培養(yǎng)經(jīng)過(guò)重編程誘導(dǎo)成的人多能干細(xì)胞,并能夠連續(xù)傳代,保持其干性。細(xì)胞株描述:細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù) (SCSP-1301 ) ,細(xì)胞代數(shù)為17代。
【產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】
1、化學(xué)成分明確的無(wú)血清培養(yǎng)基，用于hiPSC的體外擴(kuò)增和長(zhǎng)期培養(yǎng)；
2、配方經(jīng)過(guò)科學(xué)優(yōu)化，采用熱穩(wěn)定型細(xì)胞因子，緩沖體系更強(qiáng)；
3、支持隔天換液，可實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞傳代，操作簡(jiǎn)便，適用性強(qiáng)；
4、擴(kuò)增性能更優(yōu)，支持超過(guò)50代的無(wú)滋養(yǎng)層培養(yǎng)，細(xì)胞核型無(wú)異常、無(wú)明顯分化現(xiàn)象。
【產(chǎn)品性能】
1.復(fù)蘇后轉(zhuǎn)移至此培養(yǎng)基中能夠連續(xù)穩(wěn)定傳 35代以上。
2.細(xì)胞傳代時(shí)間為3~ 5 天。
3.細(xì)胞表型:TRA-1-60290%, OCT42 95%。
4.細(xì)胞形態(tài):
形狀: 圓形或橢圓形, 邊界清晰, 邊緣光滑
厚度:集落呈扁平但略微隆起的二維結(jié)構(gòu), 中央稍厚。
外觀:在顯微鏡下呈 "鵝卵石 "狀, 細(xì)胞密集排列。
【產(chǎn)品使用所需要的試劑耗材】
產(chǎn)品名稱 | 品牌貨號(hào) |
ip sc無(wú)血清培養(yǎng)基套裝 | YO CON/NC0401 、 NC0401. S |
stem pro TMAc cuta se T M細(xì)胞解離試劑 | Thermo/A11 10501 |
ip sc無(wú)血清凍存液 | YO CON/NC0603 |
D PBS(不含鈣鎂離子 ) | YO CON/BS0402 |
DM EM/F12 | YO CON/NC0406 |
Y27632 | M CE/HY-10583 |
Mat riGel | corning/354277 |
另需細(xì)胞培養(yǎng)板 /瓶 /皿, 15mL 離心管和移液管等細(xì)胞培養(yǎng)耗材。 | |
2.試劑準(zhǔn)備
培養(yǎng)基配制 :
溫下預(yù)溫 20~30min, 時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng), 切勿強(qiáng)光或紫外照射。
ip sc完培養(yǎng)基 2~8℃可避光保存半個(gè)月, 由于蛋白在溶液中易降解, 所以最好 1 周內(nèi)用完。 科研小量、 多次使用時(shí),建議添加劑融化后立即分裝 (添加劑出廠后僅允許凍融一次) 。完培養(yǎng)基配制完成后, 減少預(yù)溫次數(shù),根據(jù)需求可提前進(jìn)行分裝。
Mat rigel工作液配制和包被 :
根據(jù)康寧的批次報(bào)告進(jìn)行分裝。 分裝后的小包裝可在 -80℃下最多儲(chǔ)存6個(gè)月。
取出一份基質(zhì)膠加入到 36 mL 的 DM EM/F12 中, 包被四個(gè) 6 孔培養(yǎng)板 (1.5 mL /孔) 。
(1 ) 將一份基質(zhì)膠從 -80℃取出, 在4℃冰箱中的冰上解凍, 直到成為液體 (同時(shí)預(yù)冷移液管或槍頭) 。
(2)將裝有 36mL的 DM EM/F12培養(yǎng)基的離心管插入冰中 (包被過(guò)程中保持低溫,避免因局部溫度過(guò)高凝固而影響包被質(zhì)量) 。
(3) 吸取 1mL預(yù)冷 DM EM/F12 加入含有基質(zhì)膠的小管中, 移液槍吹打混勻 20 次后, 吸入到預(yù)冷培養(yǎng)基 (50mL離心管) 中,移液管吹打混勻 20次。
(4) 立即用稀釋后的基質(zhì)膠溶液包被 6 孔板。
(5) 包被后, 需在 37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置 1小時(shí), 可立即使用。 如果不立即使用,將6孔板用封口膜封好后,放入4℃冰箱中最多儲(chǔ)存 7天。 如果基質(zhì)膠溶液并未全覆蓋表面, 則無(wú)法實(shí)現(xiàn)最佳的 IPSC 培養(yǎng); 因此, 不建議使用含有溶液已蒸發(fā)區(qū)域的培養(yǎng)板。
(6) 使用時(shí), 輕輕地將培養(yǎng)板向一個(gè)角落傾斜, 吸取包被液上清, 注意不要碰到底面包被好的基質(zhì)膠。 立即加入培養(yǎng)基和細(xì)胞。如果已將培養(yǎng)板在4℃下儲(chǔ)存, 在使用之前, 還需將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱 (37℃ )下放置 30~60分鐘。
配制Y27632溶液:
Y27632粉末溶解, 配成濃度為 10 mM 的儲(chǔ)存液。 分裝后冷凍于 -20℃, 6個(gè)月 內(nèi)使用。
Y27632提高復(fù)蘇和傳代后的存活率和克隆形成率, 所以只在復(fù)蘇步驟和傳代步驟添加, 推薦添加的終濃度為 10M,換液后不再添加且換液時(shí)長(zhǎng)不宜超過(guò)24小時(shí)。
服務(wù)熱線：19120106455
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